Contamos con 3 métodos para hacer el diagnóstico etiológico: la baciloscopia, la identificación de la cepa por cultivo y la intradermoreacción.La baciloscopia con tinción de Zielh-Neelsen es la clásica búsqueda del bacilo en la clásica búsqueda del bacilo en la expectoración, en la que previamente se ha hecho digestión del moco con NaOH, acetil-sicteína; recientemente el uso de cloruro de acetil-piridinio ha dado buenos resultados ya que casi no afecta la viabilidad bacteriana para hacer los cultivos. El fosfato trisódico solo o mezclado con cloruro de benzalconio es de gran utilidad, y si la muestra se refrigera durante 24 hrs, disminuye en forma importante la viabilidad de las cepas contaminantes.
La digestión y descontaminación debe hacerse con criterio bacteriológico, cuando consideramos que es necesario.Además de la tinción de Ziehl-Neelsen y de la tinción de Kinyoun, en las que se observan los bacilos de color rojo intenso, se puede hacer la técnica de inmunofluorescencia con rodamina auramina ligada a anticuerpos contra el bacilo y buscar la fluorescencia con luz ultravioleta; esta técnica parece ser más rápida en la búsqueda del bacilo.Para hacer la identificación de la especie que es de gran utilidad, y casi debe ser necesidad, porque si bien el cuadro clínico en manos de gente con mucha experiencia unida a la baciloscopia, pudiera compaginar en muchos casos; en muchos otros, otra micobacteria podría ser la responsable o bien el hallazgo de bacilos ácidos-alcohol resistentes saprobios, pudiera interpretarse como tuberculosis.
Todas las muestras con o sin baciloscopia positiva deben ser cultivadas en los medios de cultivo apropiados, como son el medio de la American Thoracic Society, medio de Middlebrook 7H 10, medio de Middlebrook &H 11, medio de Dubos o Mycobactosel.Deben inocularse 4 tubos, de los cuales 2 se cubrirán con papel negro y se dejarán 2 descubiertos. Se incuban 1 cubierto y 1 destapado a 37 ºC y tambien los restantes, uno cubierto y otro destapado, a temperatura ambiente. Esto es con el objeto de observar la formación de pigmento por influencia de la luz o de la oscuridad y para observar el crecimiento a temperatura ambiente.
Debemos saber que M.tuberculosis es de crecimiento lento y no forma pigmento en ninguna circunstancia, ademas no crece a temperatura ambiente, por todo lo cual deberemos esperar que las colonias empiecen a observarse a la tercera o cuarta semana de incubación a 37ªC.
La clasificación de Runyon es de gran utilidad para hacer la identificación de las especies:
Grupo O: De crecimiento lento: M.tuberculosis, M. africanum, M.bovis, M. ulcerans.
Grupo I: De crecimiento lento, fotocromógeno: M. Kansasii, M.marinum, M simiae.
Grupo II: De crecimiento lento,escotocromógeno: M. scrofulaceum, M. szulgai, M.gordonae, M. flavescens y M. xenopi.
Grupo III: De crecimiento lento, no cromogénico: M. avium, M.intracellulare, M.gastri, M.terrae, complex y M. triviale.
Grupo IV: De crecimiento rápido: M.fortuitum, M.chelonei, M.phlei, M. smegmatis y M. vaccae.
De todos estos grupos, los más frecuentemente encontrados en infecciones humanas son los del grupo O. Otras especies son raras en infecciones humanas, algunas de ellas son comensales y fo0rman parte de la flora nativa sin ningún significado patológico (M. smegmatis, M.phlei de crecimiento rápido, M.gordonae, M. fla- vescens, M. gastri y M.triviale de crecimiento lento).
M. tuberculosis es un bacilo que se tiñe con dificultad, pero una vez teñido es resistente a la decoloración por el alcohol ácido en la tinción de Ziehl – Neelsen, por esta razón se les llama a todas las micobacterias bacilos ácido-alcohol resistentes/BAAR). Con la tinción de Gram son positivos, no tienen flagelos, cápsula, fimbrias o pilis ni esporas, son aerobios estrictos.
M. tuberculosis es una especie mucho más resistente a los agentes físicos y químicos antibacterianos, que otras bacterias particularmente resistentes a la desecación; se puede mantener viable sin humedad durante varios meses, pero la pasteurización lo inactiva y es el punto de referencia para este método ideado por Pasteur.
La digestión y descontaminación debe hacerse con criterio bacteriológico, cuando consideramos que es necesario.Además de la tinción de Ziehl-Neelsen y de la tinción de Kinyoun, en las que se observan los bacilos de color rojo intenso, se puede hacer la técnica de inmunofluorescencia con rodamina auramina ligada a anticuerpos contra el bacilo y buscar la fluorescencia con luz ultravioleta; esta técnica parece ser más rápida en la búsqueda del bacilo.Para hacer la identificación de la especie que es de gran utilidad, y casi debe ser necesidad, porque si bien el cuadro clínico en manos de gente con mucha experiencia unida a la baciloscopia, pudiera compaginar en muchos casos; en muchos otros, otra micobacteria podría ser la responsable o bien el hallazgo de bacilos ácidos-alcohol resistentes saprobios, pudiera interpretarse como tuberculosis.
Todas las muestras con o sin baciloscopia positiva deben ser cultivadas en los medios de cultivo apropiados, como son el medio de la American Thoracic Society, medio de Middlebrook 7H 10, medio de Middlebrook &H 11, medio de Dubos o Mycobactosel.Deben inocularse 4 tubos, de los cuales 2 se cubrirán con papel negro y se dejarán 2 descubiertos. Se incuban 1 cubierto y 1 destapado a 37 ºC y tambien los restantes, uno cubierto y otro destapado, a temperatura ambiente. Esto es con el objeto de observar la formación de pigmento por influencia de la luz o de la oscuridad y para observar el crecimiento a temperatura ambiente.
Debemos saber que M.tuberculosis es de crecimiento lento y no forma pigmento en ninguna circunstancia, ademas no crece a temperatura ambiente, por todo lo cual deberemos esperar que las colonias empiecen a observarse a la tercera o cuarta semana de incubación a 37ªC.
La clasificación de Runyon es de gran utilidad para hacer la identificación de las especies:
Grupo O: De crecimiento lento: M.tuberculosis, M. africanum, M.bovis, M. ulcerans.
Grupo I: De crecimiento lento, fotocromógeno: M. Kansasii, M.marinum, M simiae.
Grupo II: De crecimiento lento,escotocromógeno: M. scrofulaceum, M. szulgai, M.gordonae, M. flavescens y M. xenopi.
Grupo III: De crecimiento lento, no cromogénico: M. avium, M.intracellulare, M.gastri, M.terrae, complex y M. triviale.
Grupo IV: De crecimiento rápido: M.fortuitum, M.chelonei, M.phlei, M. smegmatis y M. vaccae.
De todos estos grupos, los más frecuentemente encontrados en infecciones humanas son los del grupo O. Otras especies son raras en infecciones humanas, algunas de ellas son comensales y fo0rman parte de la flora nativa sin ningún significado patológico (M. smegmatis, M.phlei de crecimiento rápido, M.gordonae, M. fla- vescens, M. gastri y M.triviale de crecimiento lento).
M. tuberculosis es un bacilo que se tiñe con dificultad, pero una vez teñido es resistente a la decoloración por el alcohol ácido en la tinción de Ziehl – Neelsen, por esta razón se les llama a todas las micobacterias bacilos ácido-alcohol resistentes/BAAR). Con la tinción de Gram son positivos, no tienen flagelos, cápsula, fimbrias o pilis ni esporas, son aerobios estrictos.
M. tuberculosis es una especie mucho más resistente a los agentes físicos y químicos antibacterianos, que otras bacterias particularmente resistentes a la desecación; se puede mantener viable sin humedad durante varios meses, pero la pasteurización lo inactiva y es el punto de referencia para este método ideado por Pasteur.